Det er ofte problemer av ett eller annet slag i prosessen med cellekultur. Ikke undervurder cellekultur, men den inneholder universitetsspørsmål. Ved å kommunisere med brukere vil du finne mange problemer som kan unngås. Følgende er vanlige i prosessen med cellekultur. Analyser årsaken til unormaliteten.
petriskål
1. Dyrkede celler fester seg ikke til veggen
mulig årsak
1. Overdreven trypsinfordøyelse;
2. Mykoplasma-forurensning;
3. pH-verdien til mediet er for alkalisk (NaHCO3-dekomponering);
4. Aldring av celler;
5. Startkonsentrasjonen av inokulerte celler er for lav eller for høy.
Løsning
1. Forkort trypsinfordøyelsestiden eller reduser trypsinkonsentrasjonen;
2. Isoler kulturen og påvis mykoplasma. Rengjør stativet eller inkubatoren. Hvis det oppdages mykoplasmaforurensning, kast kulturen;
3. Bruk steril eddiksyreløsning for å justere pH eller fyll med steril CO2;
4. Aktiver nye konserveringsceller;
5. Juster den optimale inokulerte cellekonsentrasjonen.
2. Klynger av suspensjonsceller
mulig årsak
1. Kulturmediet inneholder kalsium- og magnesiumioner;
2. Mykoplasma-forurensning;
3. Overfordøyelse av protease forårsaker cellelyse;
4. DNA-kontaminering.
Løsning
1. Vask cellene med kalsium- og magnesiumfri balansert saltløsning, og blås forsiktig og sug
2. Cellene oppnår en enkeltcellesuspensjon;
3. Separer kulturen og påvis mykoplasma;
4. DNasel behandling av celler.
3. Dyrkede celler vokser sakte
mulig årsak
1. På grunn av utskifting av annet kulturmedium eller serum;
2. Noen komponenter som er nødvendige for cellevekst i kulturmediet, slik som glutamin eller vekstfaktorer, er utarmet eller mangler eller har blitt ødelagt;
3. Det er en liten mengde bakterie- eller soppforurensning i kulturen;
4. Feil oppbevaring av reagenser;
5. Startkonsentrasjonen av inokulerte celler er for lav;
6. Celler har aldret;
7. Mykoplasma forurensning.
Løsning
1. Sammenlign sammensetningen av det nye mediet og det originale mediet, sammenlign det nye serumet og det gamle serumet for å støtte celleveksteksperimenter, og la cellene gradvis tilpasse seg det nye mediet;
2. Bytt til nylaget kulturmedium, eller tilsett glutamin og vekstfaktorer;
3. Bruk antibiotikafritt kulturmedium for dyrking, hvis det viser seg å være kontaminert, kast kulturen;
4. Serum bør oppbevares ved -10 til -20 grader. Kulturmediet bør oppbevares ved 2-8 grader i mørket. Det serumholdige komplette kulturmediet bør oppbevares ved 2-8 grad og bør brukes opp innen 1 uke;
5. Øk startkonsentrasjonen av inokulerte celler;
6. Bytt til en ny konserveringscelle;
7. Isoler kulturen og påvis mykoplasma. Rengjør stativet og inkubatoren. Hvis det oppdages mykoplasmaforurensning, kast kulturen.
For det fjerde vokser de dyrkede cellene dårlig
mulig årsak
A. Tilstanden til selve cellen
1. Antall cellepassasjer er stort, og cellene eldes;
2. Celleinokulasjonsmengde: for lav inokulasjonsmengde, langsom cellevekst;
3. Passasjen av celler er for sent: celleforgiftning, som påvirker veksten av celler etter passasje;
4. Trypsinfordøyelsestiden er for lang eller for kort: hvis tiden er for lang dør cellene; hvis tiden er for kort, er cellene ikke fullstendig separert i klynger, og cellene dør;
5. Kryokonservering og utvinning av celler: langsom frysing og øyeblikkelig lysis.
B. Forurensning
1. Mykoplasma forurensning;
2. Muggforurensning.
C, kulturmedium eller serum
1. Ingen validering før serum- eller mediumerstatning;
2. Om det valgte mediet er egnet;
3. Om mediumpreparatet er passende;
4. Om mediumpreparatet er nøyaktig.
D. å dyrke miljøet
1. Er tilgangen på CO2 normal?
2. Temperaturen på inkubatoren eller shakeren er riktig kontrollert.
Løsning
Lag målrettede løsninger i henhold til de fire mulige årsakene ovenfor
1. Vær oppmerksom på tilstanden til cellene: for eksempel antall passasjer, mengden av inokulering, etc.;
2. Unngå forurensning (bruk vanlig, lovlig og sporbart serum);
3. Bruk passende serum eller medium, helst verifisert;
4. Vær oppmerksom på laboratoriemiljøet.
Mulige årsaker til celledød i kultur
1. Det er ingen CO2 i inkubatoren;
2. Temperaturen i inkubatoren svinger for mye;
3. Celler blir skadet under kryokonservering eller utvinning;
4. Det osmotiske trykket til kulturmediet er feil;
5. Akkumulering av giftige metabolitter i kulturmediet.
Løsning
1. Oppdag CO2 i inkubatoren;
2. Sjekk temperaturen i inkubatoren;
3. Ta en ny bevart celleart;
4. Detekter det osmotiske trykket til kulturmediet;
5. Bytt til fersk kulturmedium;
