Cellekulturmediet må inneholde tilstrekkelig med næringsstoffer til å møte stoffene og energien som kreves for biokjemiske reaksjoner som nycellesyntese og cellemetabolisme. Hovedkomponentene i cellekulturmediet er vann, aminosyrer, vitaminer, karbohydrater, uorganiske salter og andre hjelpenæringsstoffer. Derfor må vi ta hensyn til steriliseringsmetoden til cellekulturmedium og relaterte forholdsregler i daglige eksperimenter.
cellekultur
1. Steriliseringsmetoder og forholdsregler for ulike cellekulturmedier
Steriliseringsmetoder for cellekulturmedium er delt inn i autoklavesterilisering og membranfiltreringssterilisering. Ulike kulturmedier kan ha forskjellige steriliseringsmetoder på grunn av deres forskjellige næringsstoffer.
Autoklav
Noen medier, som MEM, kan autoklaveres, disse mediene inneholder vanligvis ikke L-glutamin og natriumbikarbonat, og tilsettes vanligvis etter at mediet har blitt autoklaveret. I tillegg kan høytrykksglutamat (som L-alanyl-L-glutamin) brukes i stedet for L-glutamin. Det autoklaverbare mediet er fullstendig sterilisert med minimalt tap av næringsstoffer ved 121 grader, 15 psi og 15 minutter, uten å forlenge steriliseringstiden.
De fleste cellekulturmedier er ikke egnet for autoklavering. Fordi kulturmediet ofte inneholder vitaminer, proteiner, polypeptider, vekstfaktorer og andre stoffer, er disse stoffene utsatt for denaturering eller funksjonstap under høy temperatur eller strålingseksponering, så de ovennevnte væskene blir stort sett filtrert og sterilisert for å fjerne bakterier. Det er mange filtermembraner tilgjengelig for filtrering og sterilisering, og deres materialer er for det meste PES, nylon, polykarbonat, celluloseacetat, nitrocellulose, PTFE, keramikk, etc. Membranfiltreringssterilisering er en vanlig og praktisk metode for tiden. Filtermembraner med 0.2 μm porestørrelse brukes ofte, og noen bruker 0.1 μm porestørrelse. Sammenlignet med høytrykksfiltrering har membraner en levetid og er dyrere, men er mindre ødeleggende for næringsstoffene i cellekulturmediet.
2. Forholdsregler under lagring av forskjellige cellekulturmedier
Vanligvis bør flytende cellekulturmedium ikke fryses ved -20 grader, fordi næringsstoffer kan utfelles under tining, noe som vil påvirke kultureffekten. Under normale omstendigheter bør den oppbevares ved 2 ~ 8 grader vekk fra lys. Før bruk, ta den ut av kjøleskapet og sett den i romtemperatur for utjevning. Det vanlige flytende mediet er gyldig i 6 til 12 måneder. Prøv å unngå langtidslagring av flytende cellekulturmedium. Glutaminet i den vil dekomponere sakte med forlengelse av lagringstiden. Hvis celleveksten ikke er god, kan du vurdere å teste glutamininnholdet i mediet for å finne ut om du skal tilsette glutamin. . Kommersielt tilgjengelig flytende cellekulturmedium har en spesifikk utløpsdato. Etter å ha brukt tørt pulvercellekulturmedium for å tilberede væske, bør det også oppbevares ved lav temperatur (2 ~ 8 grader). I tillegg til den enkle nedbrytningen av glutamin i mediet, kan andre komponenter i mediet også brytes ned eller utfelles med økende temperatur.
