Våre operasjonsmetoder, detaljer og teoretiske forklaringer vil bli retningslinjene for operasjonen din, for eksempel plassering av næringsløsninger og celleflasker; steriliseringsprosedyrer; For å lære riktig drift, er det nødvendig å ta hensyn til dem første gang.
Pleie celler som å oppdra barn
Celler er veldig skjøre. Det er best å sjekke det hver dag for å forhindre unormale fenomener som mangel på vann, karbondioksid, strømbrudd og utilstrekkelig temperatur i inkubatoren. Det er også nødvendig å løse disse ulykkene i tide for å unngå større smerte forårsaket av gjentatte eksperimenter. .
Gode celler bør sees i tide
Celler passeres i partier slik at selv om en batch mislykkes, er det en reserve. Det er kanskje ikke lett for den gjennomsnittlige personen som sistnevnte. Men dette er lærdommen av blodet mitt. Når cellene var forurenset, ble hele hæren utslettet. På den tiden angrer jeg på at jeg ikke beskyttet frøet.
Hver celle har sine egne egenskaper og bør behandles forskjellig.
Celler er de samme som mennesker, og ulike celler har ulike kulturegenskaper. Vær forsiktig i dyrkingsprosessen. Ulike cellelinjer bruker forskjellige medier og serum.
For eksempel er de glatte muskelcellene jeg hever veldig aktive og liker å være livlige. Om 2-3 dager vil det være en stor befolkning, og jeg liker ikke å spise og drikke så mye. Det er virkelig det beste barnet å oppdra. Endotelceller og glatte muskelceller har lignende personligheter, men de er veldig uhygieniske og slurvete. Det er mange sekretoriske celler i dem, så de må skiftes og vaskes ofte. RAW264.7-cellene er også veldig muntre og veldig spiselige. Det er nødvendig å mate dem ofte. Hodepinen er at cellene lett aktiveres. Det er bra at flasken og miljøet de dyrkes i er fri for endotoksiner, men det er vanskelig for meg som mor å tilfredsstille dem.
Forberedelse til jobb før trening
Inkludert håndtering av forbruksvarer, konfigurasjon av reagenser, sterilitetstesting, etc.
Rengjøring av glass. For glassvarer (celleflaske, flaske som inneholder næringsløsning, liten penicillinflaske osv.), bruk først vaskepulver til å rengjøre (vær oppmerksom på døde hjørner), og skyll deretter. Bløtlegg i syreløsning i mer enn 24 timer, skyll deretter med rent vann 10 ganger for å fjerne gjenværende syreløsning. Flasker osv. ristes kraftig under skylling. Deretter bløtlegges i dobbeltdestillert vann i 24 timer. Etter tørking, pakk den inn og tørk den ved 160 grader i 2 timer.
Reagenskonfigurasjon. Som væske for cellekultur kan generelt mer enn dobbeltdestillert vann brukes. Og vær oppmerksom på justeringen av pH-verdien.
Sterilitetstesting. Bruk hovedsakelig filtersterilisering: som trypsin, antibiotika, G-418-løsning, ulike medier, natriumpyruvat, glutamin, etc. Noen kan autoklaveres: PBS, D-Hank's, etc.
Reagenser lagres i alikvoter
Inkludert næringsløsning, pankreatin, serum, etc.
Serum er spesielt viktig. Serum må oppbevares ved -20 grad. Hvis én flaske ikke kan brukes opp om gangen, kan 40-50ml dispenseres i sterile syrebehandlede flasker, eller til og med oppbevares i penicillinflasker. Generelt er serumet levert av produsenten sterilt og krever ikke sterilfiltrering. Hvis det finnes mye suspendert materiale i serumet, kan serumet tilsettes mediet og filtreres sammen, og serumet skal ikke filtreres direkte. (Ingen effekt på cellekultur under normale omstendigheter)
Flaskeserumet må tines gradvis: 4 graders kjøleskap er fullstendig oppløst og deretter delt inn i emballasje. Under oppløsningsprosessen må den ristes regelmessig (vær forsiktig så du ikke forårsaker luftbobler) for å gjøre temperaturen og sammensetningen jevn og redusere forekomsten av nedbør. Ikke tin direkte fra –20 grader til 37 grader, da temperaturen endres for mye, noe som lett kan forårsake proteinkoagulering og nedbør.
Varmeinaktivering refererer til oppvarming av det fullstendig tinte serumet ved 56 grader i 30 minutter. Etter at vannbadet stiger til 56 grader, legg serumet i, vent til temperaturen stiger til 56 grader og tell tiden, rist det vanligvis jevnt en gang hvert 5. minutt eller så. Hensikten med denne varmebehandlingen er å deaktivere komplementkomponentene i serumet. Med mindre det er nødvendig, utføres denne varmebehandlingen vanligvis ikke fordi den vil føre til en betydelig økning i sediment og påvirke serumkvaliteten. Vær oppmerksom på effekten av å endre serum (inkludert forskjellige batcher) på cellene.
Sterk følelse av sterilitet
Før eksperimentet ble den ultra-rene benken sterilisert ved UV-lysbestråling i 30 minutter, den aseptiske operasjonsoverflaten ble tørket av med 70 prosent etanol, og den ultra-rene benkeviften ble slått på i noen minutter før den eksperimentelle operasjonen ble startet .
For å lære mer om laboratoriecellekultur, vennligst klikk: http://www.shjasw.com/