PCR-deteksjon
Polymerasekjedereaksjon (PCR) bruker et stykke DNA som mal, og med deltakelse av DNA-polymerase og nukleotidsubstrat forsterkes DNA til en tilstrekkelig mengde for strukturell og funksjonell analyse. PCR-deteksjonsmetoden har ekstremt viktig betydning i klinisk rask diagnostisering av bakterielle infeksjonssykdommer.
Prinsippet til PCR brukes til å amplifisere et DNA-fragment som ligger mellom to kjente sekvenser, som ligner på replikasjonsprosessen til naturlig DNA. DNA-molekylet som skal amplifiseres brukes som en mal, og et par oligonukleotidfragmenter komplementære til 5'enden og 3'enden av malen brukes som primere. Under påvirkning av DNA-polymerasen følger den malen i henhold til den halvreserverte replikasjonsmekanismen. Kjedeforlengelse til fullføring av ny DNA-syntese, gjenta denne prosessen, mål-DNA-fragmentet kan amplifiseres.
(PCR) er en metode for enzymatisk syntetisering av spesifikke DNA-fragmenter in vitro. Den består av flere trinn med høytemperaturdenaturering, lavtemperaturgløding og passende temperaturforlengelse. Funksjoner som høy følsomhet, enkel betjening og tidsbesparelse. Den kan brukes ikke bare i grunnforskning som genisolering, kloning og nukleinsyresekvensanalyse, men også i diagnostisering av sykdommer eller et hvilket som helst sted der det er DNA og RNA. Polymerasekjedereaksjon (Polymerase Chain Reaction, forkortet PCR) er også kjent som cellefri molekylær kloning eller spesifikk DNA-sekvens in vitro primer-rettet enzymatisk amplifikasjonsteknologi.
Den semi-reserverte replikasjonen av DNA er en viktig måte for biologisk evolusjon og passasje. Dobbelttrådet DNA kan denatureres og smeltes til en enkelt tråd under påvirkning av en rekke enzymer. Med deltakelse av DNA-polymerase og en promoter, kan dobbelttrådet DNA replikeres til de samme to molekylene i henhold til prinsippet om komplementær baseparing. I forsøk ble det funnet at DNA også kan denatureres og smeltes ved høye temperaturer, og det kan renatureres til dobbelttråder igjen når temperaturen senkes. Derfor, ved å kontrollere denatureringen og renatureringen av DNA gjennom temperaturendringer, og designe primere som promotere, kan tilsetning av DNA-polymerase og dNTP-er fullføre in vitro-replikasjonen av spesifikke gener.
Det enkle poenget er å bruke spesialutstyr, bruke dNTPS, Mg2+, spesifikke primere, DNA-polymerase og buffersystem, legge til mal, som er DNA-prøven for in vitro-amplifikasjon, og utføre elektroforese. Hvis det kan amplifiseres, og størrelsen på det amplifiserte produktet er i samsvar med målbåndet, betyr det at primeren og malen er spesifikke, og deteksjonsindeksen er positiv.
PCR-nukleinsyredeteksjonsmetoder og trinn
Nukleinsyretesting krever fem trinn: prøvetaking, prøveoppbevaring, retensjon, nukleinsyreekstraksjon og datamaskintesting.
Nukleinsyredeteksjon
Det første trinnet er å samle menneskelig sekret og tørke av nesehulen eller bakveggen i svelget og bilaterale svelgmandler med en neseprøve eller en svelgprøve.
I det andre trinnet beholdt det medisinske personalet prøven, senket teststykkehodet ned i cellekonserveringsløsningen og skrudde på rørhetten umiddelbart etter å ha brutt halen.
I den tredje delen legger du prøven i en lufttett pose, oppbevar den og send den til inspeksjon i tide.
Det fjerde trinnet er å sende prøven til laboratoriet for å trekke ut nukleinsyre.
I det femte trinnet blir ekstraktet utsatt for en fluorescerende PCR-amplifikasjonsreaksjon.
Trenger også litt forbruksvarer og instrumenter
PCR-instrument, PCR-rør, pipettespiss, dypbrønnplate, reservoar og reagenser tilsatt
