Vi må vaske PCR-settet med åtte rør etter bruk. Det er noen måter å rengjøre PCR Octal Kit på. Hva bør jeg være oppmerksom på når jeg bruker den?
Prinsipp for den eksperimentelle metoden: Silikagelmembran binder seg til DNA under forhold med mye salt, og separeres fra DNA under forhold med lite salt. Primere, mononukleotider, enzymer, mineralolje, saltioner osv. skilles ut i den DNA-holdige vaskeløsningen da de ikke har lignende egenskaper som DNA.
Eksperimentelle materialer: PCR-produkter, reagenser, sett, PCR-rensesett, instrumenter, forbruksvarer, 96-brønn-DNA-preparatplater, 96-brønn-dyp-brønn-plater, 96-brønn-V-formede plater
1. PCR-produsenten med åtte rør snakker om sammensetningen, lagringen og stabiliteten til settet
1. Instruksjoner, forbruksvarer: 96-brønn-DNA-prepareringsplate, 96-brønn 1,6 ml dypbrønnplate, 96-brønn-V-formet plate.
2. Buffer PCR-A: DNA-bindende løsning. Oppbevares tett lukket i romtemperatur. Hvis det kommer nedbør, bør det løses i et varmt bad på 65 grader og avkjøles til romtemperatur før bruk.
3. Buffer W2-konsentrat: fjern saltløsningen. Før bruk, tilsett etanol til volumet spesifisert på flasken, bland godt og oppbevar ved romtemperatur. 100 prosent etanol eller 95 prosent absolutt etanol kan brukes.
4. Eluent: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5, lagret i forseglet tilstand ved romtemperatur.
2. Produsenten av PCR åttekoblede rør snakker om operasjonstrinnene
Brukere kan velge undertrykk eller sentrifugering.
A. Negativt trykkmetode
1. Koble til undertrykksenheten på riktig måte, plasser 96-brønn-DNA-prepareringsplaten på undertrykksenheten; tilsett 3 ganger buffer PCR-A til PCR, enzymfordøyelse, enzymmerking eller sekvenseringsreaksjonsløsning (hvis buffer PCR-A er mindre enn 100 ul, tilsett 100 ul); bland godt og overfør til en 96-brønn-DNA-prepareringsplate, slå på og juster undertrykket til -25-30 tommer Hg, og aspirer sakte opp løsningen i platen.
2. Tilsett 0,3 ml buffer W2 og absorber løsningen. Vask to ganger med 0,3 ml buffer W2 på samme måte.
Bekreft tilsetning av absolutt etanol til det angitte volumet Buffer W2-konsentrat på reagensflasken.
3. Oppretthold undertrykket og ekstraher 96-brønn-DNA-prepareringsplaten i 10 minutter.
4. Mal 96-brønn-DNA-prepareringsplaten 6 ganger på det lange fibrøse vevet med dreneringsrøret vendt ned.
5. Plasser 96-brønn-DNA-preparatplaten på en 96-godt V-formet plate, tilsett 25-30ul vann eller eluer til midten av membranen, og la stå i 1 minutt i romtemperatur. DNA ble eluert ved sentrifugering ved 3 000 xg i 5 min.
B. Sentrifugal
1. Tilsett 3 volumer Buffer PCR-A (hvis Buffer PCR-A er mindre enn 100 ul, tilsett 100 ul) til PCR, fordøyelse, enzymmerking eller sekvenseringsreaksjoner; bland og overfør til 96-brønn-DNA i 96-brønnforberedelsesplate. Plasser DNA-preparatplaten i en 96-brønn 1,6 ml dypbrønnplate, sentrifuger ved 1000 xg i 1 min, og kast filtratet.
2. I en 96-brønn-DNA-prepareringsplate, tilsett 0,3 ml buffer W2, sentrifuger ved 1000×g i 1 minutt, og kast filtratet. Vask igjen på samme måte med 0,3 ml buffer W2. Bekreft tilsetning av absolutt etanol til det angitte volumet Buffer W2-konsentrat på reagensflasken.
3. Plasser 96-brønn-DNA-prepareringsplaten i en 96-brønn 1,6 ml dypbrønnsplate og sentrifuger ved 3 000×g i 10 minutter.
4. Plasser 96-brønn-DNA-preparatplaten i en ren 96-godt V-formet bunnplate, tilsett 25-30ul vann eller eluer til midten av membranen, og la stå i 1 minutt ved romtemperatur. DNA ble eluert ved sentrifugering ved 3 000 xg i 5 min.
PCR-oktalrørprodusenter snakker om saker som trenger oppmerksomhet:
1. Oppvarming av elueringsvæsken eller vannet til 65 grader kan bidra til å forbedre elueringseffektiviteten.
2. DNA-molekyler er sure, det anbefales å lagre i 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5 eluat.
