Påføring av serumflaske
Serumflasken er laget av borosilikatglass med lav ekstraksjon, og den fargeløse klare flasken oppfyller kravene til USP Type I og ASTM E 438 Type I Standard Class A. Den kan autoklaveres ved 121 grader i 20 minutter, og kan deles i 125 ml , 250ml, 500ml, 1L, 2L i henhold til volumet.
Serumflaske er en beholder for oppbevaring av serum, som vanligvis er laget av PET-materiale ved injeksjonsstrekkblåseprosess. Mediet er næringsstoffet som kreves for cellevekst. Ifølge kilden er den delt inn i syntetisk medium og naturlig medium, som begge kan lagres i serumflasker.
Serumflaske
Naturlig medium:
Det mest brukte naturlige mediet er serum, i utgangspunktet kalveserum. Serum inneholder en rekke cellevekstfaktorer, adhesjonsfremmende faktorer og deres multiaktive substanser. Kombinert med syntetisk medium kan celler formere seg og vokse jevnt. Serum må oppbevares i spesielle serumflasker ved -5 grader til -20 grader.
Syntetisk medium:
Syntetisk medium er strengt formulert i henhold til typen og mengden av stoffer som kreves av celler. Det er mange typer og kjente komponenter, som letter kontrollen av eksperimentelle forhold. Inneholder karbohydrater, aminosyrer, lipider, uorganiske salter, vitaminer, sporstoffer og cellevekstfaktorer. Sammenlignet med det naturlige mediet kan imidlertid enkelte naturlige ukjente komponenter ikke erstattes av kjente kjemiske komponenter. Derfor må det grunnleggende syntetiske mediet som brukes i cellekultur også tilsette en viss mengde naturlige mediumkomponenter for å overvinne den syntetiske kulturen. Utilstrekkelig base, den vanligste praksisen er å tilsette kalveserum.
Formen på serumflasken er firkantet, lett å ta tak i, motstandsdyktig mot det meste av syre- og alkalikorrosjon, sprøhetstemperaturen er -70 grader, og den har fortsatt en viss seighet ved -30 grad. Det er en god emballasjebeholder, enten det er naturlig medium eller syntetisk kultur. kan oppbevares i serumflasker.
For isolering, kultur og identifikasjon av humane endotelceller fra navlestrengsblod og etablering av acellulære vaskulære stillaser ved forbedret fryse-tine-metode
For å utforske gjennomførbarheten og den kliniske anvendelsesverdien av endotel-progenitorceller isolert og dyrket fra humant navlestrengsblod.
Metoder: Navlestrengsblodet fra fostrene som gjennomgikk fulltids keisersnitt i obstetrisk og gynekologisk avdeling, det første tilknyttede sykehuset ved Bengbu Medical College ble samlet inn, plassert i en serumflaske som inneholdt 50U/ml heparin under aseptiske forhold, lagret i en 4 graders isboks og transportert til celler I kulturrommet ble mononukleære celler fra navlestrengsblod oppnådd ved tetthetsgradientsentrifugering. De oppnådde mononukleære cellene ble delt i to deler, og føtalt kalveserum M199 medium (FCS-M199) og autologt serum M199 medium (AS-M199) ble tilsatt. Og de ble sådd i kulturskåler med og uten humant fibronektin (HFN) (merket som henholdsvis: F(0), F(1), A(0), A(1)). In vitro induksjon, differensiering og ekspansjon ble utført.
De morfologiske endringene til adherente celler under hele induksjons- og differensieringsprosessen ble observert, og de ble identifisert fra forskjellige vinkler kombinert med relaterte teknikker som immunhistokjemi, immunfluorescens og flowcytometri.
Resultater: Etter 12 dagers dyrking begynte mononukleære celler fra navlestrengsblod å feste seg. Etter 3d begynte spindelformen å dukke opp, og deretter økte antallet adherente celler gradvis og ble gradvis spindelformet. Ved dyrking i opptil en uke ble det dannet en typisk koloni med spindelceller rundt og runde celler i midten. Når cellene ble dyrket i 14 dager, koblet de sammenkoblede celleklyngene seg gradvis sammen og dannet en nettverkslignende struktur. Samtidig, med den kontinuerlige økningen av dyrkingstiden, begynte også de lange spindelcellene å bli gradvis kortere, og viste en typisk belegningssteinslignende forandring.
De adherente cellene ble dyrket i én uke og det ble observert at antallet celler i mediet med humant fibronektin var signifikant høyere enn det uten humant fibronektin, og det var ingen signifikant endring i antall celler i de to forskjellige mediene.
