Cellekulturmedium er næringsgrunnlaget for kunstig etterligning av in vivo-vekstmiljøet til dyreceller og opprettholdelse av overlevelse og spredning av celler in vitro. et næringsstoff. Så hva er de vanlige problemene som oppstår ved bruk av cellekulturmedium? La oss gjøre en analyse.
1. Valg av buffersystem og pH-endring av cellekulturmedium
Siden den optimale pH-verdien for de fleste celler er mellom 7.0 og 7.4, kan avvik fra dette området ha skadelige effekter på celleveksten. Imidlertid er pH-kravene til ulike celler ikke helt like. Primære dyrkede celler har generelt dårlig toleranse for pH-svingninger, mens uendelige cellelinjer har sterk toleranse. Derfor, i primærkulturen, er buffersystemet i kulturmediet viktigere. Det generelle cellekulturmediet bruker et balansert saltsystem, men forskjellige kulturmedier eller samme serie med kulturmedier bruker forskjellige balanserte saltsystemer. For eksempel har 199-serier og MEM-serier alle Hanks' systemkulturmedium og Earles systemkultur. utgangspunkt. Noen medier er ikke det ovennevnte konvensjonelle balanserte saltsystemet, for eksempel RPMI1640 medium, F12 medium. Det balanserte saltsystemet til MEM lavserummediet er heller ikke et konvensjonelt balansert saltsystem, og bufferkapasiteten til det balanserte saltsystemet er sterkere enn det konvensjonelle balanserte saltsystemet.
cellekultur
Det er mange årsaker til pH-fall under cellekultur. Når cellene vokser veldig raskt, synker pH-verdien vanligvis raskt, noe som kan løses ved rettidig passasje, øke passasjeforholdet eller redusere serumvolumet. I tillegg kan overstramming av kulturflaskelokket, utilstrekkelig bufferkapasitet i NaHCO3-buffersystemet, feil saltkonsentrasjon i kulturmediet, bakterie-, gjær- eller soppkontaminering også føre til at pH-verdien faller ofte raskt. På dette tidspunktet kan du løse det på følgende måter:
1) Øk NaHCO3-konsentrasjonen i kulturmediet eller reduser CO2-konsentrasjonen i inkubatoren. Når NaHCO3-innholdet er mellom 2,0 g/L og 3,7 g/L, er den tilsvarende CO2-konsentrasjonen 5~10 prosent;
2) Bytt til et CO2-uavhengig kulturmedium;
3) Løsne flaskekorken ordentlig. Tilsett HEPES-buffer til kulturmediet for å gjøre den endelige konsentrasjonen 10-25 mM;
4) Bruk kulturløsningen basert på Earles salt i CO2 kulturmiljøet, og bruk kulturløsningen tilberedt av Hanks salt i det atmosfæriske kulturmiljøet;
5) Kast kultur eller steriliser med antibiotika hvis kontaminering er årsaken.
2. Flere viktige tilsetningsstoffer brukes ofte i cellekulturmedier og problemer som bør tas hensyn til i bruksprosessen
Fenolrødt brukes som en indikator på pH i cellekulturmedier. Generelt kan pH-verdien til mediet bedømmes av indikatoreffekten av fenolrødt, men innholdet av fenolrødt i lavserum eller serumfritt cellekulturmedium er forskjellig fra det i vanlig cellekulturmedium, og kan ikke observeres med blotte øyne eller pH-verdien bestemmes empirisk, og det anbefales å bruke et pH-meter for måling. Fenolrødt har vanligvis ingen signifikant effekt på kvaliteten på biologiske produkter produsert i serumholdige cellekulturmedier, og kan også fjernes ved renseteknikker, men fenolrødt kan forårsake intracellulær natrium/kaliumubalanse i serumfrie cellekulturmedier , påvirker celleveksten.
cellekulturplate
Natriumbikarbonat brukes hovedsakelig som buffersystem i cellekulturmedium, og har også den effekten å regulere osmotisk trykk. Vanligvis er anbefalt mengde natriumbikarbonat i bruksanvisningen for produktet en standard og sikker mengde, som oppnås basert på praktisk erfaring på vitenskapelig grunnlag. Men på grunn av ulike cellelinjer (stammer) kan den samme cellen tilpasse seg ulike miljøer (ulik celletoleranse osv.), og det er regionale forskjeller i vannkvalitet etc. som også kan endres litt i selve produksjonen prosess, men bruken av De som trenger å gjøre de tilsvarende testene (fysiskkjemiske og celleproduksjonstester, etc.).
HEPES er en ikke-ionisk buffer med god bufferkapasitet i pH-området 7,2 til 7,4, og kan være giftig for enkelte celler ved høye konsentrasjoner. HEPES-buffer kan brukes med lave nivåer av natriumkarbonat (0.34g/L) for å oppveie økningen i osmotisk trykk forårsaket av tillegg av ekstra HEPES. Det sikre konsentrasjonsområdet er 10 ~ 25 mmol/L.
Natriumpyruvat kan brukes som en alternativ karbonkilde i cellekultur, og selv om celler foretrekker glukose som karbonkilde, kan celler også metabolisere natriumpyruvat i fravær av glukose.
Glutamin er svært ustabil i løsning. Det kan dekomponeres til 50 prosent ved 4 grader i 1 uke. Det er best å tilberede det separat i bruk, oppbevare det i et -20-graders kjøleskap og legge det til cellekulturmediet før bruk.