5 enkle tips for å forhindre feil ved bruk av PCR-plater

Polymerasekjedereaksjonen (PCR) er en av de mest kjente metodene i biovitenskapelige laboratorier.

PCR-plater er laget av førsteklasses plast for utmerket håndtering og analyse av innsamlede prøver eller resultater.

De har tynne, jevne vegger som gir presis varmeoverføring.

Som forberedelse til sanntidspåføring isoleres små fraksjoner av DNA eller RNA og lagres i PCR-plater.

PCR-plater er svært effektive ved varmeforsegling og begrenser også varmestrømmen.

Men fordi PCR-plater er effektive og pålitelige, er de utsatt for feil og unøyaktigheter ved behandling av prøver.

Så hvis du er interessert i å få PCR-plater av god kvalitet. Det er best å kontakte en pålitelig PCR-plateprodusent. Med dette kan du være sikker på å få den beste prisen.

Nedenfor er noen forholdsregler for å unngå kontaminering av reagenser eller prøver og for å forhindre unøyaktige resultater.

Desinfiser miljøet

Feil positive eller negative resultater på grunn av tilstedeværelsen av urenheter kan få deg til å tvile på resultatene.

Urenheter og forurensninger kommer i ulike former, som ikke-relatert DNA eller kjemiske tilsetningsstoffer, som til slutt reduserer effektiviteten og effektiviteten til reaksjonen.

Det er mange måter å redusere forurensningshastigheten til PCR-plater på.

Bruk av steriliserte filterspisser er en annen nyttig måte å forhindre at urenheter kommer inn i prøven gjennom pipetten.

Et helt rent sett med utstyr, inkludert pipetter og stativer, leveres spesielt for PCR-bruk. Dette vil garantere ubetydelig overføring av urenheter eller forurensninger rundt i laboratoriet.

Bruk blekemiddel, etanol på pipetter, stativer og benker for å tørke av forurensning.

Tildel reservert plass for alle PCR-reaksjoner for å redusere partikkelforurensning ytterligere.

Bruk rene hansker ved hvert trinn og bytt dem ofte.

PCR plate

Sjekk konsentrasjonen og renheten til malen.

Renheten til benker og utstyr som brukes til å analysere prøver ved bruk av PCR bør opprettholdes. Det er avgjørende å verifisere renheten til prøvene før analyse og prosessering.

Vanligvis tar analysatoren hensyn til konsentrasjonen og renhetsnivået til DNA-prøven.

Absorbansforholdet på 260nm/280nm bør ikke være mindre enn 1,8. Urenhetene ble deretter identifisert ved bruk av bølgelengder mellom 230 nm og 320 nm.

I ett eksempel ble kaotropiske salter og andre organiske forbindelser påvist ved en absorbans på 230 nm. Detekter og verifiser turbiditet i DNA-prøver samtidig ved absorbans ved 320 nm.

Unngå overbelastning av PCR-plater og produkter

Selv om det er ønskelig å kjøre flere produkter samtidig, kan det føre til krysskontaminering av PCR-plater.

Overbelastning av PCR-plater med forskjellige produkter er sløsing og gjør det vanskelig å identifisere prøver.

Hold oversikt over alikvoter av PCR-reagenser

Kontinuerlige fryse-/tinesykluser og hyppig bruk av alikvoter kan skade PCR-reagenser, enzymer og DNTP-er gjennom omkrystallisering.

Tilstreb alltid å overvåke frekvensen av alikvoter som brukes når du forbereder prøver for analyse.

Den foretrukne LIMS er mer egnet for å kontrollere lager og mengder reagenser og prøver som skal fryses eller tines.

Velg den optimale glødetemperaturen.

Å velge og bruke feil glødetemperatur er en annen måte PCR-resultater inneholder feil på.

Noen ganger går ikke responsen som planlagt. Glødetemperaturen må senkes for å fremme en vellykket reaksjon.

Men å senke temperaturen øker sjansen for falske positiver og primer-dimerer.

Ved bruk av PCR-plater er det viktig å bekrefte analysen av smeltekurven da det er en god indikator for å velge riktig glødetemperatur.

Primerdesignprogramvare hjelper designen, gir riktig glødetemperatur, og reduserer feil i PCR-plater direkte.

pcr plate